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蛋白质组学(Proteomics)是后基因组时代的重要研究领域,旨在全面研究生物体内所有蛋白质的表达、结构、功能、修饰及其相互作用。它不仅是基因组学的补充,更是理解生命活动分子机制的核心手段,它是一种基于质谱检测的分析技术。
该方法的大致过程是将从样本中提取到的蛋白水解/酶解为肽段,然后进行质谱检测,根据肽段的鉴定和定量信息推测出其对应蛋白的鉴定和定量结果。因此,目前的蛋白质组学样品制备流程,通常均会包括蛋白提取、蛋白酶解和肽段除盐三个步骤。
一、蛋白提取:
蛋白质提取旨在从含多种干扰物的生物样本中释放并纯化蛋白质。通过裂解液(含SDS、尿素等去垢剂)破坏样本结构,结合超声/研磨促进蛋白溶解。针对杂质或SDS干扰,可采用沉淀/复溶等方法纯化。血浆需去除高丰度蛋白以提高检测灵敏度。提取方法需适配后续分析需求。
二、蛋白酶解:
蛋白质是一类含有空间结构的高分子化合物,在酶解前需要提前加入还原剂提高酶解效率。蛋白质组学中常用胰蛋白酶进行酶解处理,将蛋白酶解为适宜质谱检测的肽段长度。
三、肽段除盐:
蛋白样本前处理通常是在含盐缓冲体系中进行,目前常使用层析法,主要原理是SDB或C18材质的层析柱可以结合待检测肽段,从而达到分离和纯化肽段的目的。脱盐后的肽段通过真空荔枝视频免费观看版最新抽干后,即可于4℃或-20℃短期保存,等待后续的质谱检测。
四、如何建立一个高效的样品制备流程?
在蛋白提取和酶解阶段,越来越多的公司采用一体式自动化前处理仪器。如北京青莲百奥生物有限公司生产的前处理机器人,可同时处理 1-96 个样本。酶解后的样品放入荔枝视频免费观看版最新干燥后进质谱检测。荔枝视频免费观看版最新以其高通量、快速、避免交叉污染等优势,迅速成为蛋白质组学测试中的必备仪器。
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